25(OH)Vitamine D total

Reference: 
TVITD-ELISA

La Vitamine D est le terme générique utilisé pour désigner la Vitamine D2 ou ergocalciférol, et la Vitamine D3 ou cholécalciférol.
La Vitamine D2 est essentiellement d’origine végétale alors que la Vitamine D3 a une double origine, animale et cutanée. La peau, exposée aux ultraviolets des rayons solaires, synthétise la vitamine D3 naturellement.
Plus de 90% des besoins en Vitamine sont issus de l’exposition au soleil.
Vitamines D3 et D2, libérées dans le sang sont transportées par la protéine de liaison (DBP).
Elles sont ensuite métabolisées dans le foie en 25(OH)
Vitamine D puis dans le rein en 1,25(OH)Vitamine D, forme active de la molécule.
Les deux formes de la Vitamine contribuent au statut général en Vitamine D d’un individu.

Physiologie de la Vitamine D

Clinical interest: 

Osteomalacie/Ostéoporose
Rachitisme
Cancers
Maladies cardiovasculaires
Grossesse
Diabètes de type II
Maladies auto-immunes

 

Method of measurement: 

TVITD-ELISA est un essai immunoenzymatique en phase solide réalisé sur des plaques de microtitration. Une première incubation se fait à température ambiante et dure 2 heures. Durant cette étape, la 25(OH)Vitamine D totale (D2 et D3) présente dans les calibrateurs, les contrôles et les échantillons est libérée de sa liaison aux protéines de liaison du sérum et se fixe sur les sites de fixation d'un anticorps monoclonal spécifique. Après 1 étape de lavage, une quantité déterminée de 25(OH)Vitamine D marquée à la biotine entre en compétition avec les 25(OH)Vitamine D2 et 25(OH)Vitamine D3 non marquées présentes pour les sites de liaison de l'anticorps monoclonal spécifique, en présence de peroxydase de raifort (HRP). Après 30 minutes d'incubation à température ambiante, la plaque de microtitration est lavée afin d'arrêter la réaction de compétition. Une solution chromogène (TMB) est ajoutée et incubée pour 15 minutes. La réaction est arrêtée avec l’addition de Solution d’arrêt et la micro-plaque est alors lue à la longueur d’onde appropriée. La quantité de remplacement de substrat est déterminée colorimétriquement par la mesure de l’absorbance, qui est inversement proportionnelle à la concentration en 25(OH)Vitamine (D2 et D3).
Une courbe de calibration est tracée et les concentrations en 25(OH)Vitamine D totale (D2 et D3) des échantillons sont déterminées par interpolation de la concentration sur la courbe de calibration.

 

Advantages of the method: 

Pas d’étape d’extraction
25(OH)D2 + 25(OH)D3 mesurés
Calibrés contre LC-MS/MS
Utilisation manuelle ou automatisée
Format ELISA


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